紫外分光光度計的工作原理基于物質的吸收光譜特性。每種物質都有其的吸收光譜曲線，這是由物質的分子、原子和分子空間結構決定的。通過測定物質在特定波長下的吸光度，可以判斷或測定物質的含量，這是分光光度法定性和定量分析的基礎。

在紫外分光光度計的應用中，首先需要進行儀器校準，確保波長和吸光度的準確性。校準后，將待測樣品放入吸收池，調節單色器選擇所需的波長，通過檢測器測量吸光度。根據吸光度與濃度的關系，可以繪制標準曲線，用于定量測定未知濃度的樣品。

紫外分光光度計在化學分析中具有廣泛的應用。它可以用于測定各種無機物和有機物的濃度，如金屬離子、藥物、維生素等。此外，在環境監測、食品安全、藥物研發等領域，紫外分光光度計也發揮著重要作用。