液相色譜儀驗證
1．液相色譜儀介紹
液相色譜儀是利用混合物在液-固或不互溶的兩種液體之間分配比的差異，對混合物進行先分離，然后分析鑒定物質(zhì)成分及含量的儀器。高效液相色譜法只要求樣品能制成溶液，不受樣品揮發(fā)性的限制，流動相可選擇的范圍寬，固定相的種類繁多，因而可以分離熱不穩(wěn)定和非揮發(fā)性的、離解的和非離解的以及各種分子量范圍的物質(zhì)。與試樣預(yù)處理技術(shù)相配合，HPLC所達到的高分辨率和高靈敏度，使分離和同時測定性質(zhì)上十分相近的物質(zhì)成為可能，能夠分離復(fù)雜相體中的微量成分。由于HPLC具有高分辨率、 高觀靈敏度、速度快、色譜柱可反復(fù)利用，流出組分易先收集等優(yōu)點，因而被廣泛應(yīng)用的生物化學(xué)，食品分析，醫(yī)藥研究，環(huán)境分析，無機分析等各種領(lǐng)域。
2．液相色譜儀的原理
液相色譜儀由儲液器、泵、進樣器、色譜柱、檢測器、記錄儀等幾部分組成。儲液器中的流動相被高壓泵打入系統(tǒng)，樣品溶液經(jīng)進樣器進入流動相，被流動相載入色譜柱（固定相）內(nèi)，由于樣品溶液中的各組分在兩相中具有不同的分配系數(shù)，在兩相中作相對運動時，經(jīng)過反復(fù)多次的吸附-解吸的分配過程，各組分在移動速度上產(chǎn)生較大的差別，被分離成單個組分依次從柱內(nèi)流出，通過檢測器時，樣品濃度被轉(zhuǎn)換成電信號傳送到記錄儀，數(shù)據(jù)以圖譜形式打印出來。
3．為什么液相色譜儀要做驗證呢？
這是為了保證液相色譜儀分析檢測結(jié)果準(zhǔn)確、可靠，所以必須對所用到的組成系統(tǒng)各部分進行驗證，以證明該系統(tǒng)符合檢測的目的和要求，這就是儀器驗證。從本質(zhì)上講，儀器驗證就是根據(jù)檢測物質(zhì)的要求，預(yù)先對儀器設(shè)置一定的參數(shù)范圍及合適的檢測器，并通過設(shè)計合理的試驗來驗證該儀器是否符合檢測項目的要求。儀器驗證是保證整個試驗是否能成功的先決條件，只有經(jīng)過驗證的儀器，確保該儀器各部分都在良好的情況下才能用于物質(zhì)成分的分析檢測，這樣使檢測結(jié)果更準(zhǔn)確，盡可能減小誤差。
4．液相色譜儀的驗證項目
（1）安裝確認(rèn)
a. 文件確認(rèn)
b. 附件確認(rèn)
c. 安裝環(huán)境確認(rèn)
d. 安裝情況確認(rèn)
（2）運行功能確認(rèn)
a. 運行功能確認(rèn)
b. 軟件控制功能測試
c. 流速設(shè)定誤差測試
d. 流速重復(fù)性測試
e. 柱溫設(shè)定誤差測試
f. 柱溫穩(wěn)定性測試
（3）性能確認(rèn)
a. 基線噪聲測試
b. 基線漂移測試
c. 檢測限測試
d. 重復(fù)性測試
5．液相色譜儀使用的注意事項如下
（1）流動相均需色譜純度，使用前過濾除去其中的顆粒性雜質(zhì)和其他物質(zhì)（使用0.45μm或更細的膜過濾）。
（2）流動相過濾后要用超聲波脫氣，脫氣后應(yīng)該恢復(fù)到室溫后使用，脫氣后的流動相要小心振動盡量不引起氣泡。
（3）不能用純乙腈作為流動相，這樣會使單向閥粘住而導(dǎo)致泵不進液。
（4）長時間不用儀器，應(yīng)該將柱子取下用堵頭封好保存，注意不能用純水保存柱子，而應(yīng)該用有機相(如，甲醇等)，因為，純水易長霉。
（5）更換流動相時應(yīng)該先將吸濾頭部分放入燒杯中邊振動邊靖洗，然后插入新的流動相中。更換無互溶性的流動相時要用異丙醇過渡一下。
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